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小鼠血小板清除抗體 試劑
產(chǎn)品時間：2025-10-30
小鼠血小板清除抗體 試劑克隆：多克隆非免疫大鼠免疫球蛋白同形像統(tǒng)計圖：大鼠免疫球蛋白形式：purif應(yīng)用程序：負(fù)控制#R300大?。?.5毫克
小鼠血小板清除抗體 試劑
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同形像統(tǒng)計圖：大鼠免疫球蛋白
形式：purif
應(yīng)用程序：負(fù)控制#R300
大?。?.5毫克
技術(shù)協(xié)議
小鼠血小板表面糖蛋白的流式細(xì)胞分析
-制備稀釋或洗凈的全血
-制備洗滌小鼠血小板
-血小板表面糖蛋白表達(dá)單色分析
-血小板活化雙色分析
免疫組織化學(xué)（含丙酮固定冰凍切片）
免疫沉淀反應(yīng)
免疫印跡（Western Blot Analysis）
小鼠血小板表面糖蛋白的流式細(xì)胞分析
緩沖液和試劑
Tris緩沖鹽水/肝素（TBS/Hep）： 20 mM Tris/HCl；137 mM NaCl；pH值7.3;含肝素20 U/ml。
磷酸鹽緩沖鹽水（PBS）： 137 mM NaCl；2.7 mM KCl；1.5 mM KH2PO4；8mm Na2HPO4；pH值7.14。
Tyrode’s Buffer（改性）：134 mM NaCl；0.34 mM Na2HPO4；2.9 mM KCl；12mm NaHCO3；20 mM Hepes；pH值7.0;5 mM葡萄糖；0.35% （w/v）牛血清白蛋白
Apyrase: 10u /ml H2Obidest原液（-20℃保存）
前列腺素（前列腺素2，PGI2）： 1mm儲存在H2Obidest中（保存在-20°C）
CaCl2: 1 M的H2Obidest庫存
最重要的
配制稀釋或洗凈的全血
用肝素化玻璃毛細(xì)血管（如環(huán)帽）從眶后神經(jīng)叢取50µl血液，放入含有200µl TBS/肝素（20 U/ml）的1.5 ml管中。
用1ml Tyrode緩沖液稀釋，用于流式細(xì)胞術(shù)分析。
制備洗血，將稀釋后的血液900 x g離心5分鐘，去除上清，將微球重懸于1.25 ml Tyrode緩沖液中。
實(shí)驗開始前，直接加入1mm的CaCl2。
注意：對于凝血酶誘導(dǎo)的血小板活化，必須去除血漿以防止抗凝血酶活性
最重要的
小鼠洗凈血小板的制備
洗滌血小板的制備是一種更耗時的方法，需要更多的血液，但產(chǎn)生的血小板制備可以使用幾個小時。
從眶后神經(jīng)叢用1.5 cm的玻璃毛細(xì)血管采集0.5 - 1ml血液，放入1.5 ml的管中，管中含有200µl TBS/肝素（20 U/ml）。
樣品在500 x g下離心5分鐘，將富血小板血漿（PRP）轉(zhuǎn)移到新管中。為了最好地恢復(fù)血小板，服用全白期，包括一些紅細(xì)胞。
將血小板懸液在300 × g下離心8分鐘，將不含紅細(xì)胞的PRP移入新管。
加入0.5µM prostacyclinin (PGI2)， 1300 × g離心5分鐘。
將血小板顆粒重懸于1ml Tyrode’s緩沖液中，加入0.02 U/ml apyrase和0.5µM prostacycyclin， 37℃孵育5min， 1300 × g離心5min。
重復(fù)步驟5，將血小板小球重懸于0.5 ml Tyrode緩沖液中，加入0.02 U/ml apyrase， 37℃孵育30 min。
最重要的
血小板表面糖蛋白的單色分析
將5µl特異性或陰性對照抗體與25µl稀釋的全血或洗過的血混合在測定管中，旋渦混合1-2秒。
室溫孵育15分鐘。
加入400µl PBS停止反應(yīng)，30分鐘內(nèi)分析。
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